III lncRNA cDNA Synthesis Kit反轉(zhuǎn)錄
Script III lncRNA cDNA Synthesis Kit（With dsDNase）采用第三代高效逆轉(zhuǎn)錄酶，具有更強的延伸能力和穩(wěn)定性技術研究，并配備了具有DNA分解活性的特殊dsDNase探索創新，只需一步操作， 即可同時完成基因組清除與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)發展契機，操作方便快捷穩定。逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可以用于PCR，克隆基因III lncRNA cDNA Synthesis Kit反轉(zhuǎn)錄
Script III lncRNAcDNA Synthesis Kit（With dsDNase）
lncRNAcDNA 第一鏈合成試劑盒（去基因組）
III lncRNA cDNA Synthesis Kit反轉(zhuǎn)錄
目錄號:71500
產(chǎn)品內(nèi)容
Components | 71500-50 25 rxns (20 μl/rxn) | 71500-100 100 rxns (20 μl/rxn) |
5x TRUE Reaction Mix | 100 μl | 400 μl |
dsDNase | 25 μl | 100 μl |
lncRNA-RT primer | 25 μl | 100 μl |
RNase free H2O | 1 ml | 1.5 ml |
保存條件：-20℃保存齊全，有效期 12 個月廣泛關註。
產(chǎn)品簡介
Script III lncRNA cDNA Synthesis Kit（With dsDNase）采用第三代高效逆轉(zhuǎn)錄酶，具有更強的延伸能力和穩(wěn)定性機製，并配備了具有DNA分解活性的特殊dsDNase各項要求，只需一步操作， 即可同時完成基因組清除與逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)發力，操作方便快捷優勢與挑戰。逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可以用于PCR，克隆基因越來越重要的位置；也可以用于qPCR問題分析，兼容染料法和探針法，用來檢測高拷貝或低拷貝基因解決方案。
lncRNA cDNA 第一鏈合成試劑盒是專門針對長鏈非編碼RNA（lncRNA）反轉(zhuǎn)錄而開發(fā)的產(chǎn)品不負眾望。與 mRNA 相比，lncRNA具有豐度低、GC 含量差異大聯動、二級結(jié)構(gòu)更復(fù)雜等特性改革創新，傳統(tǒng)反轉(zhuǎn)錄試劑lncRNA 難以達到理想的效果。本試劑盒含有高效去除基因組 DNA 的 dsDNase發揮重要作用，可有效避免殘留的基因組DNA 對后續(xù)檢測結(jié)果的干擾自行開發。本試劑盒中中使用的反轉(zhuǎn)錄酶是通過分子改造后的新型反轉(zhuǎn)錄酶，具有更強的 RNA 親和性和熱穩(wěn)定性取得顯著成效，使本試劑盒在通讀 GC 含量高處理方法，二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜，低豐度的 RNA 模板和抗逆性等方面表現(xiàn)突出責任，特別適合表達水平相對較低服務，二級結(jié)構(gòu)相對復(fù)雜的 lncRNA 的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。
操作步驟：第一連cDNA合成 (以20 μl反應(yīng)體系為例)
1．反應(yīng)體系的配制
使用 RNase-Free PCR 管在冰上配制：(使用前持續向好，請將各組分輕彈混勻舉行，點甩離心收集至管底，置冰上備用不容忽視。)
Components | Volume |
Total RNA/mRNA | 50 ng - 5 μg / 5 ng -500 ng |
lncRNA-RT primer | 1 μl |
5x TRUE Reaction Mix | 4 μl |
dsDNase | 1 μl |
RNase free H2O | To 20 μl |
2．輕柔吸打混勻習慣，點甩離心，置 PCR 儀進行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)組建。
25℃孵育 10 min 后覆蓋，產(chǎn)物用于 PCR，42℃孵育 30 min進展情況；產(chǎn)物用于 qPCR重要的作用，42℃孵育 15 min。
注意：如果模板具有復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)或高 GC 區(qū)域研究，可以先只加 RNA 模板搶抓機遇、引物和 RNase free H2O，混勻去創新，65℃變性 5 min結論，冰上冷卻，點甩離心后加入其它成分品質，將 42℃孵育溫度提升至 50°C積極回應，有助于提高產(chǎn)量慢體驗。
3． 85°C加熱 5 sec深化涉外，失活RTase和dsDNase，終止反應(yīng)製高點項目。
逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于PCR或qPCR反應(yīng)的必然要求，或保存于-20°C，并在半年內(nèi)使用；長期存放建議分裝后在-70°C保存狀況，cDNA應(yīng)避免反復(fù)凍融範圍和領域。
PCR（建議取2 - 4 μl的cDNA產(chǎn)物原液作為PCR模板。）
1. 常規(guī)擴增： 71800-2x Lightning Taq PCR MasterMix (10sec/kb)
2. 高保真擴增：71814-2×LongHiFi PCR MasterMix (≤10kb業務，15sec/k)
qPCR（建議取1~2μl cDNA產(chǎn)物原液作為20μl qPCR反應(yīng)體系的模板。如果基因表達量較高，可以根據(jù)實際情況適當稀釋cDNA模板后使用完善好。）
III lncRNA cDNA Synthesis Kit反轉(zhuǎn)錄
