2x SYBR Green qPCR Mix(NO ROX)熒光定量
2x SYBR Green qPCR Mix是SYBR Green I 嵌合染料法專(zhuān)用的qPCR試劑，為2x 預(yù)混液為產業發展，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分是目前主流，可減少操作步驟，縮短加樣時(shí)間重要手段，降低污染幾率穩中求進。2x SYBR Green qPCR Mix(NO ROX)熒光定量
2x SYBR Green qPCR Mix（NO ROX）
2x SYBR Green qPCR Mix(NO ROX)熒光定量
目錄號(hào)：71313
產(chǎn)品內(nèi)容
Components | 71313-500 500 rxns (20 μl/rxn) | 71313-2500 2500 rxns (20 μl/rxn) |
2x SYBR Green qPCR Mix | 1.25 ml x4 | 1.25 ml x20 |
RNase-Free H2O | 5 ml | 5 ml x5 |
保存條件
-20℃保存，有效期24個(gè)月不折不扣。使用前再獲，充分融解，輕柔顛倒混勻最深厚的底氣，短期使用可放在 4 ℃敢於挑戰，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
2x SYBR Green qPCR Mix是SYBR Green I 嵌合染料法專(zhuān)用的qPCR試劑應用擴展，為2x 預(yù)混液過程中，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分，可減少操作步驟積極，縮短加樣時(shí)間大數據，降低污染幾率。其核心組分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶好宣講，配合精心優(yōu)化的Buffer體系連日來，有效抑制非特異性擴(kuò)增，可對(duì)寬廣濃度范圍的模板進(jìn)行準(zhǔn)確定量不斷進步，獲得穩(wěn)定可靠的qPCR結(jié)果信息化技術，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)認為、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)責任製。
本品不含參比染料ROX，適用于不需要ROX校準(zhǔn)的儀器良好，常見(jiàn)的是Bio-rad系列雙重提升、Roche、國(guó)產(chǎn)qPCR儀倍增效應。
操作步驟：
1. 將DNA模板結果、引物、2 x SYBR qPCR Mix重要意義、RNase-Free H2O溶解并置于冰上備用規則製定。
2. 冰上配制qPCR反應(yīng)體系：（以20μl反應(yīng)體系為例）
Components | Volume (20μl) | Final Concentration |
2x SYBR Green qPCR Mix | 10 μl | 1× |
DNA Template | Variable | As required |
Forward Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
RNase-Free H2O | Up to 20 μl | Not applicable |
注意：
1） 推薦模板加樣量為1-2μl / 20μl反應(yīng)體系，cDNA原液≤總反應(yīng)體系的10%引領，基因組DNA的量為10-100 ng表現明顯更佳。因不同種類(lèi)的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同，可對(duì)模板進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)源_定最佳的模板使用量。
2） 通常推薦引物濃度為0.2 μM技術先進，就可以得到較好的結(jié)果示範，反應(yīng)效果不佳時(shí)可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整。擴(kuò)增效率不高的情況下數字化，可提高引物濃度新格局；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，可降低引物濃度開展攻關合作，由此優(yōu)化反應(yīng)體系特點。
3. qPCR反應(yīng)程序
注意：
1） 本產(chǎn)品兼容性強(qiáng)，適用于不同廠家情況正常、型號(hào)的熒光定量PCR儀製度保障，絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果。建議采用兩步法qPCR反應(yīng)程序各領域。一般來(lái)說(shuō)模式，二步法擴(kuò)增特異性高，三步法擴(kuò)增效率高集聚效應。如果融鏈曲線(xiàn)較差貢獻，可以嘗試兩步法擴(kuò)增或提高退火溫度；如果因使用Tm值較低的引物等原因提升，得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)持續，可嘗試加長(zhǎng)延伸時(shí)間或者進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增。
2） 根據(jù)引物的Tm值進(jìn)行退火&延伸（退火）溫度的設(shè)定；
3） 延伸（退火&延伸）時(shí)間的設(shè)置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時(shí)間自行調(diào)整高品質。
4） 融解曲線(xiàn)分析請(qǐng)以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定。
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