2x SYBR Green qPCR Mix(NO ROX)熒光定量
2x SYBR Green qPCR Mix是SYBR Green I 嵌合染料法專用的qPCR試劑運行好，為2x 預(yù)混液充分，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分方案，可減少操作步驟互動式宣講，縮短加樣時間組建，降低污染幾率。2x SYBR Green qPCR Mix(NO ROX)熒光定量
2x SYBR Green qPCR Mix（NO ROX）
2x SYBR Green qPCR Mix(NO ROX)熒光定量
目錄號：71313
產(chǎn)品內(nèi)容
Components | 71313-500 500 rxns (20 μl/rxn) | 71313-2500 2500 rxns (20 μl/rxn) |
2x SYBR Green qPCR Mix | 1.25 ml x4 | 1.25 ml x20 |
RNase-Free H2O | 5 ml | 5 ml x5 |
保存條件
-20℃保存結構，有效期24個月深入交流研討。使用前，充分融解效果較好，輕柔顛倒混勻集聚效應，短期使用可放在 4 ℃，避免反復(fù)凍融廣泛應用。
產(chǎn)品簡介
2x SYBR Green qPCR Mix是SYBR Green I 嵌合染料法專用的qPCR試劑提升，為2x 預(yù)混液，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分生動，可減少操作步驟提單產，縮短加樣時間，降低污染幾率綠色化。其核心組分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶設計，配合精心優(yōu)化的Buffer體系，有效抑制非特異性擴增至關重要，可對寬廣濃度范圍的模板進行準確定量主動性，獲得穩(wěn)定可靠的qPCR結(jié)果，具有靈敏度高改進措施、特異性強領域、穩(wěn)定性好等特點。
本品不含參比染料ROX，適用于不需要ROX校準的儀器，常見的是Bio-rad系列溝通機製、Roche、國產(chǎn)qPCR儀體系。
操作步驟：
1. 將DNA模板宣講活動、引物、2 x SYBR qPCR Mix註入新的動力、RNase-Free H2O溶解并置于冰上備用快速融入。
2. 冰上配制qPCR反應(yīng)體系：（以20μl反應(yīng)體系為例）
Components | Volume (20μl) | Final Concentration |
2x SYBR Green qPCR Mix | 10 μl | 1× |
DNA Template | Variable | As required |
Forward Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
RNase-Free H2O | Up to 20 μl | Not applicable |
注意：
1） 推薦模板加樣量為1-2μl / 20μl反應(yīng)體系，cDNA原液≤總反應(yīng)體系的10%工藝技術，基因組DNA的量為10-100 ng發揮作用。因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同，可對模板進行梯度稀釋系統，以確定最佳的模板使用量十分落實。
2） 通常推薦引物濃度為0.2 μM，就可以得到較好的結(jié)果逐步顯現，反應(yīng)效果不佳時可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進行調(diào)整作用。擴增效率不高的情況下，可提高引物濃度近年來；發(fā)生非特異性反應(yīng)時銘記囑托，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系積極拓展新的領域。
3. qPCR反應(yīng)程序
注意：
1） 本產(chǎn)品兼容性強充分發揮，適用于不同廠家、型號的熒光定量PCR儀應用，絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果解決。建議采用兩步法qPCR反應(yīng)程序。一般來說動力，二步法擴增特異性高不斷豐富，三步法擴增效率高。如果融鏈曲線較差多種方式，可以嘗試兩步法擴增或提高退火溫度同時；如果因使用Tm值較低的引物等原因，得不到良好的實驗結(jié)果時臺上與臺下，可嘗試加長延伸時間或者進行三步法PCR擴增幅度。
2） 根據(jù)引物的Tm值進行退火&延伸（退火）溫度的設(shè)定；
3） 延伸（退火&延伸）時間的設(shè)置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時間自行調(diào)整效高性。
4） 融解曲線分析請以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進行設(shè)定各有優勢。
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