2×SYBR Green qPCR Mix (Low ROX)熒光定量
2x SYBR Green qPCR Mix (Low ROX) 是SYBR Green I 嵌合染料法專用的qPCR試劑發揮重要作用，為2x 預(yù)混液體製，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分，可減少操作步驟良好，縮短加樣時間雙重提升，降低污染幾率。其核心組分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶2×SYBR Green qPCR Mix (Low ROX)熒光定量
2x SYBR Green qPCR Mix (Low ROX)
2×SYBR Green qPCR Mix (Low ROX)熒光定量
目錄號:71610
產(chǎn)品內(nèi)容
Components | 71610-500 500 rxns (20 μl/rxn) | 71610-2500 2500 rxns (20 μl/rxn) |
2x SYBR Green qPCRMix(LowROX) | 1.25 ml x4 | 1.25 ml x20 |
RNase-Free H2O | 5 ml | 5 ml x5 |
保存條件
-20℃保存大幅拓展，有效期 24 個月助力各業。使用前，充分融解重要工具，輕輕顛倒混勻將進一步，短期使用可放在 4 ℃，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品簡介
2x SYBR Green qPCR Mix (Low ROX) 是SYBR Green I 嵌合染料法專用的qPCR試劑實際需求，為2x 預(yù)混液配套設備，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分，可減少操作步驟性能，縮短加樣時間建議，降低污染幾率。其核心組分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶設計，配合精心優(yōu)化的Buffer體系，有效抑制非特異性擴增，可對寬廣濃度范圍的模板進行準確定量敢於監督，獲得穩(wěn)定可靠的qPCR結(jié)果對外開放，具有靈敏度高、特異性強組建、穩(wěn)定性好等特點。
預(yù)混液中已加入低濃度ROX參比染料結構，適用于ABI 7500深入交流研討，7500 Fast, QuantStudio 3/5 System, ViiA™7, QuantStudio 6/7Flex；Stratagene MX4000, MX 3005, MX 3000效果較好；Corbett Rotor Gene 3000等需要低濃度ROX機型集聚效應。
操作步驟：
1. 將DNA模板、引物廣泛應用、2x SYBR Green qPCR Mix (Low ROX)提升、RNase-Free H2O溶解并置于冰上備用。
2. 冰上配制qPCR反應(yīng)體系：（以20μl反應(yīng)體系為例）
Components | Volume (20μl) | Final Concentration |
2x SYBR Green qPCR Mix (Low ROX) | 10 μl | 1× |
DNA Template | Variable | As required |
Forward Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
RNase free H2O | Up to 20 μl | Not applicable |
1） 推薦模板加樣量為1-2μl / 20μl反應(yīng)體系情況，cDNA原液≤總反應(yīng)體系的10%，基因組DNA的量為10-100 ng。因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同等多個領域，可對模板進行梯度稀釋互動講，以確定最佳的模板使用量。
2） 通常推薦引物濃度為0.2 μM至關重要，就可以得到較好的結(jié)果主動性，反應(yīng)效果不佳時可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進行調(diào)整。擴增效率不高的情況下改進措施，可提高引物濃度範圍；發(fā)生非特異性反應(yīng)時，可降低引物濃度發展的關鍵，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。
3. qPCR反應(yīng)程序
注意：
1） 絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果。一般來說，二步法擴增特異性高體系，三步法擴增效率高宣講活動。如果融鏈曲線較差，可以嘗試兩步法擴增或提高退火溫度註入新的動力；如果因使用Tm值較低的引物等原因快速融入，得不到良好的實驗結(jié)果時，可嘗試加長延伸時間或者進行三步法PCR擴增工藝技術。
2） 根據(jù)引物的Tm值進行退火&延伸（退火）溫度的設(shè)定發揮作用；
3） 延伸（退火&延伸）時間的設(shè)置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時間自行調(diào)整。
4） 融解曲線分析請以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進行設(shè)定系統。
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