2 x SYBR Green qPCR Mix 熒光定量
2x SYBR Green qPCR Mix (High ROX) 是SYBR Green I 嵌合染料法專用的qPCR試劑意料之外，為2x 預(yù)混液引人註目，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分的方法，可減少操作步驟，縮短加樣時(shí)間結構重塑，降低污染幾率推廣開來。2 x SYBR Green qPCR Mix 熒光定量
2x SYBR Green qPCR Mix (High ROX)
2 x SYBR Green qPCR Mix 熒光定量
目錄號(hào):71611
產(chǎn)品內(nèi)容
Components | 71611-500 500rxns(20μl/rxn) | 71611-2500 2500rxns(20μl/rxn) |
2x SYBR Green qPCR Mix (High ROX) | 1.25 ml x4 | 1.25 ml x20 |
RNase-Free H2O | 5 ml | 5 ml x5 |
保存條件
-20℃保存，有效期 24 個(gè)月貢獻法治。使用前密度增加，充分融解，輕輕顛倒混勻相對較高，短期使用可放在 4 ℃信息化，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
2x SYBR Green qPCR Mix (High ROX) 是SYBR Green I 嵌合染料法專用的qPCR試劑創新內容，為2x 預(yù)混液全方位，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分，可減少操作步驟，縮短加樣時(shí)間估算，降低污染幾率。其核心組分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶達到，配合精心優(yōu)化的Buffer體系，有效抑制非特異性擴(kuò)增大型，可對(duì)寬廣濃度范圍的模板進(jìn)行準(zhǔn)確定量的可能性，獲得穩(wěn)定可靠的qPCR結(jié)果，具有靈敏度高不可缺少、特異性強(qiáng)系列、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。
預(yù)混液中已加入高濃度的ROX參比染料服務為一體，適用于ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT and 7900HT Fast,ABI Step One, ABI Step One Plus以及其它需要高濃度ROX機(jī)型方案。
操作步驟：
1. 將DNA模板、引物相互配合、2x SYBR Green qPCR Mix (High ROX)統籌發展、RNase-Free H2O溶解并置于冰上備用。
2. 冰上配制qPCR反應(yīng)體系：（以20μl反應(yīng)體系為例）
Components | Volume (20μl) | Final Concentration |
2x SYBR Green qPCR Mix (High ROX) | 10 μl | 1× |
DNA Template | Variable | As required |
Forward Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
RNase free H2O | Up to 20 μl | Not applicable |
1） 推薦模板加樣量為1-2μl / 20μl反應(yīng)體系積極回應，cDNA原液≤總反應(yīng)體系的10%慢體驗，基因組DNA的量為10-100 ng。因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同全會精神，可對(duì)模板進(jìn)行梯度稀釋左右，以確定最佳的模板使用量。
2） 通常推薦引物濃度為0.2 μM智能化，就可以得到較好的結(jié)果生產製造，反應(yīng)效果不佳時(shí)可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整拓展基地。擴(kuò)增效率不高的情況下，可提高引物濃度多元化服務體系；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)處理，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系培訓。
3. qPCR反應(yīng)程序
注意：
1） 絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果等特點。建議采用兩步法qPCR反應(yīng)程序。一般來(lái)說(shuō)，二步法擴(kuò)增特異性高同期，三步法擴(kuò)增效率高。如果融鏈曲線較差可能性更大，可以嘗試兩步法擴(kuò)增或提高退火溫度鍛造；如果因使用Tm值較低的引物等原因，得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)使命責任，可嘗試加長(zhǎng)延伸時(shí)間或者進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增共謀發展。
2） 根據(jù)引物的Tm值進(jìn)行退火&延伸（退火）溫度的設(shè)定；
3） 延伸（退火&延伸）時(shí)間的設(shè)置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時(shí)間自行調(diào)整持續創新。
4） 融解曲線分析請(qǐng)以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定創造。
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