2 x Universal SYBR qPCR Mix 熒光定量
2× Universal SYBR qPCR Mix是SYBR Green I 嵌合染料法專用的qPCR試劑大局，為2x 預混液豐富內涵，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分，可減少操作步驟效率和安，縮短加樣時間就能壓製，降低污染幾率。2 x Universal SYBR qPCR Mix 熒光定量
2 x Universal SYBR qPCR Mix
2 x Universal SYBR qPCR Mix 熒光定量
目錄號:71711
產(chǎn)品內(nèi)容
Components | 71711-500 500 rxns (20 μl/rxn) | 71711-2500 2500 rxns (20 μl/rxn) |
2x Universal SYBR qPCR Mix | 1 ml x5 | 1 ml x25 |
保存條件
-20℃保存不同需求，有效期 24 個月業務指導。使用前新品技，充分融解發展空間，輕輕顛倒混勻，短期使用可放在 4 ℃保持穩定，避免反復凍融就此掀開。
產(chǎn)品簡介
2× Universal SYBR qPCR Mix是SYBR Green I 嵌合染料法專用的qPCR試劑，為2x 預混液，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分總之，可減少操作步驟，縮短加樣時間紮實做，降低污染幾率足了準備。其核心組分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶，配合精心優(yōu)化的Buffer體系支撐作用，有效抑制非特異性擴增穩步前行，可對寬廣濃度范圍的模板進行準確定量，獲得穩(wěn)定可靠的qPCR結果著力提升，具有靈敏度高指導、特異性強、穩(wěn)定性好等特點。
預混液中含有通用型ROX體系流動性，適用于所有qPCR儀設計標準，使用qPCR Mix時不需要額外添加ROX來校正儀器。
操作步驟：
1. 將DNA模板助力各行、引物經過、2 x Universal SYBR qPCR Mix、RNase-Free H2O溶解并置于冰上備用互動互補。
2. 冰上配制qPCR反應體系：（以20μl反應體系為例）
Components | Volume (20μl) | Final Concentration |
2 x Universal SYBR qPCR Mix | 10 μl | 1× |
DNA Template | Variable | As required |
Forward Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
RNase-free H2O | Up to 20 μl | Not applicable |
注意：
1） 推薦模板加樣量為1-2μl / 20μl反應體系更加堅強，cDNA原液≤總反應體系的10%，基因組DNA的量為10-100 ng實際需求。因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同配套設備，可對模板進行梯度稀釋，以確定最佳的模板使用量性能。
2） 通常推薦引物濃度為0.2 μM建議，就可以得到較好的結果，反應效果不佳時可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進行調(diào)整設計。擴增效率不高的情況下，可提高引物濃度；發(fā)生非特異性反應時善謀新篇，可降低引物濃度推進高水平，由此優(yōu)化反應體系。
3. qPCR反應程序
注意：1） 本產(chǎn)品兼容性強供給，絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果不斷發展。一般來說，二步法擴增特異性高拓展應用，三步法擴增效率高非常重要。如果融鏈曲線較差，可以嘗試兩步法擴增或提高退火溫度自動化方案；如果因使用Tm值較低的引物等原因行動力，得不到良好的實驗結果時，可嘗試加長延伸時間或者進行三步法PCR擴增空間廣闊。
2） 根據(jù)引物的Tm值進行退火&延伸（退火）溫度的設定落到實處；
3） 延伸（退火&延伸）時間的設置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時間自行調(diào)整。
4） 融解曲線分析請以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進行設定。
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