2 x Universal Probe qPCR Mix 熒光定量
2x Universal Probe qPCR Mix是探針法專用的qPCR試劑，為2x 預(yù)混液慢體驗，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分預期，可減少操作步驟，縮短加樣時(shí)間共同努力，降低污染幾率保持競爭優勢。2 x Universal Probe qPCR Mix 熒光定量
2x Universal Probe qPCR Mix
2 x Universal Probe qPCR Mix 熒光定量
目錄號：71319
產(chǎn)品內(nèi)容
Components | 71319-500 500 rxns (20 μl/rxn) | 71319-2500 2500 rxns (20 μl/rxn) |
2x Universal Probe qPCR Mix | 1.25 ml x4 | 1.25 ml x20 |
RNase-Free H2O | 5 ml | 5 ml x5 |
保存條件
-20℃保存，有效期24個(gè)月發展邏輯。使用前方案，充分融解，輕輕顛倒混勻發展機遇，短期使用可放在 4 ℃創新延展，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品簡介
2x Universal Probe qPCR Mix是探針法專用的qPCR試劑，為2x 預(yù)混液長效機製，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分，可減少操作步驟記得牢，縮短加樣時(shí)間組建，降低污染幾率。
其核心組分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶服務體系，配合精心優(yōu)化的Buffer體系進展情況，有效抑制非特異性擴(kuò)增，可對寬廣濃度范圍的模板進(jìn)行準(zhǔn)確定量特點，獲得穩(wěn)定可靠的qPCR結(jié)果研究，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)全面協議。適用于DNA或cDNA的靶序列檢測重要作用、基因表達(dá)分析、拷貝數(shù)分析講實踐、SNP分型等增幅最大。
預(yù)混液中已添加有通用型ROX，適用于各種qPCR儀最為顯著，使用時(shí)不需要額外添加ROX來校正儀器滿意度。
操作步驟：
1. 將DNA模板、引物生產能力、探針智慧與合力、2 x Universal Probe qPCR Mix、RNase-Free H2O溶解并置于冰上備用可持續。
2. 冰上配制qPCR反應(yīng)體系：（以20μl反應(yīng)體系為例）
Components | Volume (20μl) | Final Concentration |
2 x Universal Probe qPCRMix | 10 μl | 1× |
DNA Template | Variable | As required |
Forward Primer (10μM) | 0.5 μl | 0.25 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 0.5 μl | 0.25 μM each |
Probe (10μM) | 0.5 μl | 0.25 μM each |
RNase free H2O | Up to 20 μl | Not applicable |
1） 推薦模板加樣量為1-2μl / 20μl反應(yīng)體系措施，cDNA原液≤總反應(yīng)體系的10%，基因組DNA的量為10-100 ng情況。因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同，可對模板進(jìn)行梯度稀釋，以確定最佳的模板使用量完善好。
2） 通常引物濃度為0.25 μM促進進步，就可以得到較好的結(jié)果，反應(yīng)效果不佳時(shí)可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整全過程。擴(kuò)增效率不高的情況下，可提高引物濃度積極參與；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)優勢領先，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系探討。
3. qPCR反應(yīng)程序
注意：
1） 本產(chǎn)品兼容性強(qiáng)新技術，絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果。一般來說共創美好，二步法擴(kuò)增特異性高趨勢，三步法擴(kuò)增效率高。如果融鏈曲線較差預判，可以嘗試兩步法擴(kuò)增或提高退火溫度；如果因使用Tm值較低的引物等原因，得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)應用領域，可嘗試加長延伸時(shí)間或者進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增創新為先。
2） 根據(jù)引物的Tm值進(jìn)行退火&延伸（退火）溫度的設(shè)定；
3） 延伸（退火&延伸）時(shí)間的設(shè)置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時(shí)間自行調(diào)整統籌推進。
4） 融解曲線分析請以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定行業內卷。
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