2×Universal probe qPCR Mix(UDG+)熒光定量
2x Universal Probe qPCR Mix(UDG+)是探針法專用的qPCR試劑十分落實，為2x預(yù)混液，試劑中引入了dNTP/UDG防污染系統(tǒng)系統性，可消除擴(kuò)增產(chǎn)物污染對(duì)qPCR的影響合作。適用于DNA或cDNA的靶序列檢測(cè)、基因表達(dá)分析損耗、拷貝數(shù)分析勇探新路、SNP分型等長遠所需。2×Universal probe qPCR Mix(UDG+)熒光定量
2x Universal Probe qPCR Mix (UDG+)
2×Universal probe qPCR Mix(UDG+)熒光定量
目錄號(hào)：71400
產(chǎn)品內(nèi)容
Components | 71400-500 500 rxns(20μl/rxn) | 71400-2500 2500rxns(20μl/rxn) |
2x Universal Probe qPCR Mix (UDG+) | 1.25 ml x4 | 1.25 ml x20 |
RNase-Free H2O | 5 ml | 5 ml x5 |
保存條件
-20℃保存，有效期24個(gè)月擴大。使用前非常完善，充分融解，輕輕顛倒混勻讓人糾結，短期使用可放在4℃不斷完善，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
2x Universal Probe qPCR Mix(UDG+)是探針法專用的qPCR試劑全面革新，為2x預(yù)混液方案，試劑中引入了dNTP/UDG防污染系統(tǒng)，可消除擴(kuò)增產(chǎn)物污染對(duì)qPCR的影響同時。適用于DNA或cDNA的靶序列檢測(cè)實施體系、基因表達(dá)分析、拷貝數(shù)分析幅度、SNP分型等技術創新。
其核心組分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶，配合精心優(yōu)化的Buffer體系各有優勢，有效抑制非特異性擴(kuò)增技術發展，可對(duì)寬廣濃度范圍的模板進(jìn)行準(zhǔn)確定量，獲得穩(wěn)定可靠的qPCR結(jié)果資料，具有靈敏度高自動化、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)集成。
預(yù)混液中已添加有通用型ROX更優美，適用于各種qPCR儀，使用時(shí)不需要額外添加ROX來校正儀器。
操作步驟：
1. 將DNA模板更為一致、引物、探針堅定不移、2 x Universal Probe qPCR Mix落地生根、RNase-Free H2O溶解并置于冰上備用。
2. 冰上配制qPCR反應(yīng)體系：（以20μl反應(yīng)體系為例）
Components | Volume (20μl) | Final Concentration |
2 x Universal Probe qPCR Mix (UDG+) | 10 μl | 1× |
DNA Template | Variable | As required |
Forward Primer (10μM) | 0.5 μl | 0.25 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 0.5 μl | 0.25 μM each |
Probe (10μM) | 0.5 μl | 0.25 μM each |
RNase free H2O | Up to 20 μl | Not applicable |
1） 推薦模板加樣量為1-2μl / 20μl反應(yīng)體系技術的開發，cDNA原液≤總反應(yīng)體系的10%成效與經驗，基因組DNA的量為10-100 ng。因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同健康發展，可對(duì)模板進(jìn)行梯度稀釋提供了有力支撐，以確定最佳的模板使用量。
2） 通常引物濃度為0.25 μM堅實基礎，就可以得到較好的結(jié)果積極，反應(yīng)效果不佳時(shí)可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整大數據。擴(kuò)增效率不高的情況下，可提高引物濃度經驗；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系不斷進步。
3. qPCR反應(yīng)程序
注意：
1） 本產(chǎn)品兼容性強(qiáng)信息化技術，絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果。一般來說認為，二步法擴(kuò)增特異性高責任製，三步法擴(kuò)增效率高。如果融鏈曲線較差良好，可以嘗試兩步法擴(kuò)增或提高退火溫度去完善；如果因使用Tm值較低的引物等原因，得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)必然趨勢，可嘗試加長(zhǎng)延伸時(shí)間或者進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增。
2） 根據(jù)引物的Tm值進(jìn)行退火&延伸（退火）溫度的設(shè)定橋梁作用；
3） 延伸（退火&延伸）時(shí)間的設(shè)置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時(shí)間自行調(diào)整文化價值。
4） 融解曲線分析請(qǐng)以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定。
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