lncRNA熒光定量檢測試劑盒
與 mRNA 相比大幅增加，lncRNA 具有豐度低雙向互動、GC含量差異大高質量、二級結(jié)構(gòu)更復(fù)雜等特性，傳統(tǒng)定量試劑對 lncRNA 難以達(dá)到理想的效果也逐步提升。本試劑盒中的 2× Universal lncRNA SYBR qPCR Mix是專門為 lncRNA 定量檢測而研發(fā)的新一代預(yù)混形式的熒光定量 PCR 檢測試劑組織了，其中的DNA Polymerase 采用的是抗體修飾的熱啟動形式lncRNA熒光定量檢測試劑盒
lncRNAqPCR Kit (SYBR Green)
lncRNA 熒光定量檢測試劑盒 (SYBR Green)
lncRNA熒光定量檢測試劑盒
目錄號:71503
產(chǎn)品內(nèi)容
Components | P503-500 500rxns(20μl/rxn) | P503-2500 2500rxns(20μl/rxn) |
2x Universal lncRNA SYBR qPCR Mix | 1 ml x5 | 1 ml x25 |
保存條件
-20℃保存意見征詢，有效期 24 個月。使用前集聚，充分融解，輕輕顛倒混勻完成的事情，短期使用可放在 4 ℃為產業發展，避免反復(fù)凍融。
產(chǎn)品簡介
與 mRNA 相比機製性梗阻，lncRNA 具有豐度低、GC含量差異大機製、二級結(jié)構(gòu)更復(fù)雜等特性大面積，傳統(tǒng)定量試劑對 lncRNA 難以達(dá)到理想的效果。本試劑盒中的 2× Universal lncRNA SYBR qPCR Mix是專門為 lncRNA 定量檢測而研發(fā)的新一代預(yù)混形式的熒光定量 PCR 檢測試劑反應能力，其中的DNA Polymerase 采用的是抗體修飾的熱啟動形式競爭激烈，確保本產(chǎn)品在保證較高的反應(yīng)特異性的情況下具有更高的檢測靈敏度效果。此外，Buffer 中添加了的 H-competitor 因子和 EP 組分，使得本產(chǎn)品具有廣泛的樣本普適性推廣開來，對不同GC含量的模板、具有復(fù)雜高級結(jié)構(gòu)的模板取得顯著成效、PCR 抑制劑殘留較多的模板以及長片段模板等具有非常好的擴(kuò)增適用性責任，特別適合高級結(jié)構(gòu)相對復(fù)雜，整體豐度相對較低的 lncRNA 的定量檢測持續向好。
預(yù)混液中含有通用型ROX不容忽視，適用于所有qPCR儀，使用qPCR Mix時不需要額外添加ROX來校正儀器組建。
操作步驟：
1. 將DNA模板進展情況、引物不可缺少、2 x Universal lncRNA SYBR qPCR Mix系列、RNase-Free H2O溶解并置于冰上備用。
2. 冰上配制qPCR反應(yīng)體系：（以20μl反應(yīng)體系為例）
Components | Volume (20μl) | Final Concentration |
2 x Universal lncRNA SYBR qPCR Mix | 10 μl | 1× |
cDNA Template | Variable | As required |
Forward Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
RNase free H2O | Up to 20 μl | Not applicable |
注意：
1） 推薦模板加樣量為1-2μl / 20μl反應(yīng)體系服務為一體，cDNA原液≤總反應(yīng)體系的10%方案。因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同，可對模板進(jìn)行梯度稀釋相互配合，以確定最佳的模板使用量統籌發展。
2） 通常推薦引物濃度為0.2 μM，就可以得到較好的結(jié)果積極回應，反應(yīng)效果不佳時可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整慢體驗。
擴(kuò)增效率不高的情況下，可提高引物濃度全會精神；發(fā)生非特異性反應(yīng)時左右，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系智能化。
3. qPCR反應(yīng)程序
注意：
1） 本產(chǎn)品兼容性強(qiáng)生產製造，絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果。一般來說範圍和領域，二步法擴(kuò)增特異性高取得了一定進展，三步法擴(kuò)增效率高。如果融鏈曲線較差，可以嘗試兩步法擴(kuò)增或提高退火溫度有所增加；如果因使用Tm 值較低的引物等原因，得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時促進進步，可嘗試加長延伸時間或者進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增供給。
2） 根據(jù)引物的Tm值進(jìn)行退火&延伸（退火）溫度的設(shè)定；
3） 延伸（退火&延伸）時間的設(shè)置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時間自行調(diào)整更高要求。
4） 融解曲線分析請以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定可能性更大。
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