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TOPO-TA Lightning Cloning Kit-現貨

• 型   號：42114
• 價   格：
• 更新時間：2025-04-23
• 廠家性質：經銷商

可在室溫條件下長期間，20分鐘完成TA克隆或Blunt克隆意料之外，陽性率接近100%，并且免冰浴生產效率、免熱激反應能力、免藍白斑篩選，還可以連接長達10kb的DNA片段競爭激烈。
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TOPO-TA Lightning Cloning Kit

（含酶切位點）

TOPO-TA Lightning Cloning Kit-現貨

目錄號：42114

產品內容：

保存條件：

-20℃投入力度，存放 12 個月，不影響使用效果學習。

產品簡介：

可在室溫條件下技術，20分鐘完成TA克隆或Blunt克隆，陽性率接近100%，并且免冰浴結構重塑、免熱激、免藍白斑篩選空白區，還可以連接長達10kb的DNA片段貢獻法治。

克隆步驟（≤3kb 片段）：               簡化步驟（≤10kb 片段）-- 免復蘇，免液體 LB

1應用優勢、連接：室溫 5 分鐘相對較高；                      1、連接: 37℃連接 5 min發展需要。

2創新內容、轉化：室溫 5 分鐘；                      2信息、轉化：冰浴 5 min實踐者，42℃熱激 1 min，冰上 2 min廣泛關註。

3豐富、復蘇：180rpm、37℃振蕩培養(yǎng) 10 分鐘顯示；涂板我有所應。 3、取全部菌液涂板首要任務，37℃倒置培養(yǎng)管理。

操作步驟：

1.         PCR 產物的制備：

a.       引物要求：引物不能磷酸化。

b.     酶的選擇：根據需要選擇DNA 聚合酶深入實施，該載體兼容PCR 產物的A 末端和平末端方案。

c.        電泳檢測 PCR 產物的量和質量：

①僅有目的條帶，可直接進行連接反應相互配合，無需純化統籌發展；

②如果有多條帶品質，建議凝膠回收 DNA 片段（DC011-100）;

③如果以質粒為模板的擴增，則必須進行凝膠回收慢體驗，因為模板質粒也會長出非目的菌落深化涉外。

2.         連接反應：

1）室溫（20℃-37℃）建立連接體系（10ul 體系）：

不同大小插入片段的推薦用量：

加完試劑后左右，輕彈管底混勻（或輕輕吹打混勻）又進了一步，點甩離心收集所有液體在離心管底。

2) 室溫（20℃-37℃）連接 5 分鐘生產製造。連接產物可直接轉化感受態(tài)細胞拓展基地，或置于冰上備用。

3.         轉化多元化服務體系、復蘇處理、涂板：

1）100ul 感受態(tài)細胞，置于室溫解凍（約 1 分鐘左右）實力增強，輕撣幾次將細胞均勻懸浮自然條件。

2）       加入 10ul 連接液，輕輕混勻，室溫（20℃-37℃）放置 5 分鐘體系流動性。

3）     加入 500ul 平衡至室溫的 LB 或者 SOC 培養(yǎng)基(不含抗生素)，37℃ 180 rpm 振蕩培養(yǎng) 10 min大幅拓展。

（注意：大于 3kb 的片段，振蕩培養(yǎng)時間延長至 30-60 分鐘大部分，可以增加轉化子重要工具。或者用簡化步驟）

4）        取 200?l 菌液涂板(含氨芐青霉su 50-100ug/ml）更加堅強，培養(yǎng)過夜提供有力支撐。（為得到較多克隆，4000 rpm 離心 1 min配套設備，吸棄掉部分上清發展成就，保留 100-150ul，輕彈懸浮菌體建議，取全部菌液涂板）

注意：如果使用 5ul 體系合規意識，各成分按照比例減半，使用次數可以加倍推動。

4.         轉化子的篩選鑒定：

本制品陽性率相當高協調機製，一般情況下，可以達到所見即所得有效性，只要是長出來的菌落正常（不是污染的雜菌高質量發展，轉化子數量也不算太少）資源配置，基本就包含插入。因此插入片段不超過 2-3kb 的情況下可以不用鑒定直接挑 1-2 個菌去測序攻堅克難。

1）   菌落 PCR 檢測：挑單菌落于 10ul 無菌水中機遇與挑戰，混勻，取 1ul 置于 25ul PCR 體系,用 PCR 引物或者M13 通用引物去鑒定陽性克隆相關。

2）用通用 M13F（-20）/M13R（-26）引物測序來確定是否含有目的克隆取得明顯成效。

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