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TOPO-Blunt Simple Lightning Cloning Kit-

• 型   號：42117
• 價   格：
• 更新時間：2025-04-23
• 廠家性質(zhì)：經(jīng)銷商

可在室溫條件下交流等，20分鐘完成TA克隆或Blunt克隆體系，陽性率接近100%同時，并且免冰浴行業內卷、免熱激進行培訓、免藍白斑篩選，還可以連接長達10kb的DNA片段凝聚力量。
TOPO-Blunt Simple Lightning Cloning Kit-

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TOPO-Blunt Simple Lightning Cloning Kit 

TOPO-Blunt Simple Lightning Cloning Kit-

目錄號：42117

產(chǎn)品內(nèi)容：

保存條件：

-20℃關鍵技術，存放 12 個月，不影響使用效果。

產(chǎn)品簡介：

可在室溫條件下有所提升，20分鐘完成TA克隆或Blunt克隆，陽性率接近100%參與能力，并且免冰浴法治力量、免熱激、免藍白斑篩選新的力量，還可以連接長達10kb的DNA片段技術研究。

克隆步驟（≤3kb 片段）：               簡化步驟（≤10kb 片段）-- 免復(fù)蘇，免液體 LB

1分享、連接：室溫 5 分鐘現場；                      1、連接: 37℃連接 5 min開展研究。

2高質量、轉(zhuǎn)化：室溫 5 分鐘；                      2力量、轉(zhuǎn)化：冰浴 5 min可靠，42℃熱激 1 min，冰上 2 min大型。

3數字技術、復(fù)蘇：180rpm、37℃振蕩培養(yǎng) 10 分鐘工具；涂板尤為突出。 3、取全部菌液涂板市場開拓，37℃倒置培養(yǎng)標準。

操作步驟：

1.         PCR 產(chǎn)物的制備：

a.       引物要求：引物不能磷酸化喜愛。

b.     酶的選擇：根據(jù)需要選擇DNA 聚合酶，該載體兼容PCR 產(chǎn)物的A 末端和平末端主要抓手。

c.        電泳檢測 PCR 產(chǎn)物的量和質(zhì)量：

①僅有目的條帶保障，可直接進行連接反應(yīng)，無需純化空間載體；

②如果有多條帶體製，建議凝膠回收 DNA 片段（DC011-100）;

③如果以質(zhì)粒為模板的擴增，則必須進行凝膠回收即將展開，因為模板質(zhì)粒也會長出非目的菌落向好態勢。

2.         連接反應(yīng)：

1）室溫（20℃-37℃）建立連接體系（10ul 體系）：

不同大小插入片段的推薦用量：

加完試劑后創新科技，輕彈管底混勻（或輕輕吹打混勻）更默契了，點甩離心收集所有液體在離心管底。

2) 室溫（20℃-37℃）連接 5 分鐘服務機製。連接產(chǎn)物可直接轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞流程，或置于冰上備用。

3.         轉(zhuǎn)化培訓、復(fù)蘇等特點、涂板：

1）100ul 感受態(tài)細胞，置于室溫解凍（約 1 分鐘左右），輕撣幾次將細胞均勻懸浮順滑地配合。

2）     加入 10ul 連接液，輕輕混勻薄弱點，室溫（20℃-37℃）放置 5 分鐘上高質量。

3）      加入 500ul 平衡至室溫的 LB 或者 SOC 培養(yǎng)基(不含抗生素)，37℃ 180 rpm 振蕩培養(yǎng) 10 min效高。

（注意：大于 3kb 的片段建設應用，振蕩培養(yǎng)時間延長至 30-60 分鐘，可以增加轉(zhuǎn)化子追求卓越“l展機遇；蛘哂煤喕襟E）

4）        取 200?l 菌液涂板(含氨芐青霉su 50-100ug/ml），培養(yǎng)過夜性能。（為得到較多克隆，4000 rpm 離心 1 min，吸棄掉部分上清強化意識，保留 100-150ul聽得進，輕彈懸浮菌體，取全部菌液涂板）

注意：如果使用 5ul 體系合理需求，各成分按照比例減半全技術方案，使用次數(shù)可以加倍基本情況。

4.         轉(zhuǎn)化子的篩選鑒定：

本制品陽性率相當(dāng)高，一般情況下重要的，可以達到所見即所得充分發揮，只要是長出來的菌落正常（不是污染的雜菌，轉(zhuǎn)化子數(shù)量也不算太少）高端化，基本就包含插入全面展示。因此插入片段不超過 2-3kb 的情況下可以不用鑒定直接挑 1-2 個菌去測序。

1）     菌落 PCR 檢測：挑單菌落于 10ul 無菌水中充分發揮，混勻服務，取 1ul 置于 25ul PCR 體系,用 PCR 引物或者M13 通用引物去鑒定陽性克隆。

2）用通用 M13F（-20）/M13R（-26）引物測序來確定是否含有目的克隆和諧共生。