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TOPO-Blunt Simple Lightning Cloning Kit-

• 型   號：42117
• 價   格：
• 更新時間：2025-04-23
• 廠家性質：經銷商

可在室溫條件下，20分鐘完成TA克隆或Blunt克隆研究進展，陽性率接近100%要素配置改革，并且免冰浴、免熱激溝通機製、免藍白斑篩選無障礙，還可以連接長達10kb的DNA片段。
TOPO-Blunt Simple Lightning Cloning Kit-

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TOPO-Blunt Simple Lightning Cloning Kit 

TOPO-Blunt Simple Lightning Cloning Kit-

目錄號：42117

產品內容：

保存條件：

-20℃助力各行，存放 12 個月，不影響使用效果探討。

產品簡介：

可在室溫條件下新技術，20分鐘完成TA克隆或Blunt克隆，陽性率接近100%共創美好，并且免冰浴趨勢、免熱激、免藍白斑篩選預判，還可以連接長達10kb的DNA片段。

克隆步驟（≤3kb 片段）：               簡化步驟（≤10kb 片段）-- 免復蘇，免液體 LB

1調解製度、連接：室溫 5 分鐘深入；                      1、連接: 37℃連接 5 min覆蓋範圍。

2一站式服務、轉化：室溫 5 分鐘；                      2前沿技術、轉化：冰浴 5 min支撐作用，42℃熱激 1 min，冰上 2 min深入交流。

3解決、復蘇：180rpm、37℃振蕩培養(yǎng) 10 分鐘動力；涂板不斷豐富。 3、取全部菌液涂板多種方式，37℃倒置培養(yǎng)大力發展。

操作步驟：

1.         PCR 產物的制備：

a.       引物要求：引物不能磷酸化。

b.     酶的選擇：根據(jù)需要選擇DNA 聚合酶，該載體兼容PCR 產物的A 末端和平末端集成技術。

c.        電泳檢測 PCR 產物的量和質量：

①僅有目的條帶新創新即將到來，可直接進行連接反應，無需純化創新的技術；

②如果有多條帶設計能力，建議凝膠回收 DNA 片段（DC011-100）;

③如果以質粒為模板的擴增，則必須進行凝膠回收有序推進，因為模板質粒也會長出非目的菌落質量。

2.         連接反應：

1）室溫（20℃-37℃）建立連接體系（10ul 體系）：

不同大小插入片段的推薦用量：

加完試劑后表示，輕彈管底混勻（或輕輕吹打混勻）不久前，點甩離心收集所有液體在離心管底。

2) 室溫（20℃-37℃）連接 5 分鐘質生產力。連接產物可直接轉化感受態(tài)細胞機構，或置于冰上備用。

3.         轉化提升行動、復蘇更適合、涂板：

1）100ul 感受態(tài)細胞，置于室溫解凍（約 1 分鐘左右）交流，輕撣幾次將細胞均勻懸浮引人註目。

2）     加入 10ul 連接液，輕輕混勻溝通協調，室溫（20℃-37℃）放置 5 分鐘拓展。

3）      加入 500ul 平衡至室溫的 LB 或者 SOC 培養(yǎng)基(不含抗生素)，37℃ 180 rpm 振蕩培養(yǎng) 10 min活動。

（注意：大于 3kb 的片段，振蕩培養(yǎng)時間延長至 30-60 分鐘，可以增加轉化子推進一步√剿鲃撔?；蛘哂煤喕襟E）

4）        取 200?l 菌液涂板(含氨芐青霉su 50-100ug/ml），培養(yǎng)過夜帶動擴大。（為得到較多克隆前來體驗，4000 rpm 離心 1 min，吸棄掉部分上清實現了超越，保留 100-150ul發揮重要帶動作用，輕彈懸浮菌體，取全部菌液涂板）

注意：如果使用 5ul 體系確定性，各成分按照比例減半明確了方向，使用次數(shù)可以加倍去完善。

4.         轉化子的篩選鑒定：

本制品陽性率相當高，一般情況下必然趨勢，可以達到所見即所得設備，只要是長出來的菌落正常（不是污染的雜菌，轉化子數(shù)量也不算太少）效高，基本就包含插入建設應用。因此插入片段不超過 2-3kb 的情況下可以不用鑒定直接挑 1-2 個菌去測序。

1）     菌落 PCR 檢測：挑單菌落于 10ul 無菌水中廣度和深度，混勻應用的因素之一，取 1ul 置于 25ul PCR 體系,用 PCR 引物或者M13 通用引物去鑒定陽性克隆。

2）用通用 M13F（-20）/M13R（-26）引物測序來確定是否含有目的克隆日漸深入。